目錄
前言
實(shí)驗(yàn)室守則 1
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容概述 2
實(shí)驗(yàn)一 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器設(shè)備 4
實(shí)驗(yàn)二 培養(yǎng)基的配制與細(xì)菌的純化培養(yǎng) 7
實(shí)驗(yàn)三 質(zhì)粒的提取 10
實(shí)驗(yàn)四 目的基因PCR擴(kuò)增及擴(kuò)增產(chǎn)物回收 12
實(shí)驗(yàn)五 瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA 16
實(shí)驗(yàn)六 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與T載體的連接 20
實(shí)驗(yàn)七 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備 24
實(shí)驗(yàn)八 重組質(zhì)粒的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化 26
實(shí)驗(yàn)九 陽性克隆的篩選鑒定 31
實(shí)驗(yàn)十 目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及檢測 36
實(shí)驗(yàn)十一 蛋白質(zhì)印跡法鑒定目的蛋白 41
實(shí)驗(yàn)十二 細(xì)胞中總RNA的提取 44
實(shí)驗(yàn)十三 逆轉(zhuǎn)錄PCR獲取目的基因 47
實(shí)驗(yàn)十四 Dps融合表達(dá)載體的構(gòu)建 49
實(shí)驗(yàn)十五 目的基因與融合表達(dá)載體重組、Dps融合蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及檢測 55
實(shí)驗(yàn)十六 目的蛋白的分離純化 58
實(shí)驗(yàn)十七 目的蛋白的功能鑒定 63
參考文獻(xiàn) 68
附錄1 常用試劑及其配制 69
附錄2 常用實(shí)驗(yàn)材料保存方法 80
附錄3 常用儀器設(shè)備使用說明及使用注意事項(xiàng) 81
附錄4 實(shí)驗(yàn)時(shí)間安排建議 88
附錄5 實(shí)驗(yàn)小貼士 90
附錄6 實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式 91