本教材以普通高等教育十一五*規(guī)劃教材《細胞培養(yǎng)技術》為基礎，融入工學結合的辦學思路，聘請企業(yè)一線專家參與教材建設，開發(fā)企業(yè)真正用得上的教學內(nèi)容，項目教學、行為引導式教學、任務驅動式教學等在教材中得到了充分體現(xiàn)。教材中的五個項目均取材于企業(yè)(或行業(yè))的真實工作任務，包括VERO細胞的傳代培養(yǎng)、雞胚成纖維細胞的原代培養(yǎng)、CHO細胞的大規(guī)模培養(yǎng)、抗人血白蛋白雜交瘤細胞的制備、胡蘿卜細胞的懸浮培養(yǎng)，設計了12個工作任務。每個項目都附有與之配套的實訓音像資料（時長約1個小時）和學生工作手冊，為教材使用者的自主學習提供了方便。本教材適合高等職業(yè)院校生物技術相關專業(yè)使用，也可作為生物技術人員的參考書和培訓教材。
細胞培養(yǎng)技術是生物技術的重要組成部分，是生物學各研究領域的基本技術和技能，現(xiàn)已廣泛應用在生物學、醫(yī)學、生物制藥等各個領域。目前，全國開設生物相關專業(yè)的高等職業(yè)院校共有200多所，絕大多數(shù)學校都開設細胞培養(yǎng)方面的課程，但有關細胞培養(yǎng)技術方面的書籍或教材，還不是完全適宜高職院校的基于工作過程的教學改革需求。本教材以普通高等教育十一五國家級規(guī)劃教材《細胞培養(yǎng)技術》為基礎，融入工學結合的辦學思路，聘請企業(yè)一線專家參與教材建設，開發(fā)企業(yè)真正用得上的教學內(nèi)容，項目教學、行為引導式教學、任務驅動式教學等在教材中得到了充分體現(xiàn)。教材中的五個項目均取材于企業(yè)(或行業(yè))的真實工作任務，包括VERO細胞的傳代培養(yǎng)、雞胚成纖維細胞的原代培養(yǎng)、CHO細胞的大規(guī)模培養(yǎng)、抗人血白蛋白雜交瘤細胞系的制備、胡蘿卜細胞的懸浮培養(yǎng)，設計了12個工作任務。本教材采用富媒體教材編寫理念，將教材與多媒體資源庫相結合，每個項目都附有與之配套的實訓音像資料（時長共約1個小時），讀者可以通過使用移動終端掃描與之對應的二維碼，感受時效性較強的視頻案例等多媒體素材。另外本書每個項目還附有配套的學生工作手冊和免費的教學課件，這些都為教材使用者的自主學習提供了方便。參與本書編寫的人員既有具備多年細胞培養(yǎng)技術教學經(jīng)驗的教師，也有工作在細胞培養(yǎng)一線的企業(yè)技術人員。其中，邊亞娟、周珍輝、任平國等主要負責動物細胞培養(yǎng)概論、項目一和項目二的編寫工作；秦靜遠、張乃群、金小花等主要負責植物細胞培養(yǎng)概論和項目五的編寫工作；馮暉、呂健龍等主要負責項目三的編寫工作；李恒思、唐業(yè)剛等主要負責項目四的編寫工作；其他編寫人員主要參與了實驗視頻的拍攝工作。本書還配套有豐富的立體化教學資源，可從www.cipedu.com.cn免費下載。本書在編寫與出版過程中，得到了化學工業(yè)出版社、北京協(xié)和醫(yī)學院與北京四環(huán)生物制藥有限公司等單位的大力支持。北京協(xié)和醫(yī)學院的章靜波教授審閱了全部書稿，并對本書的構架和內(nèi)容提出了許多建設性意見。北京協(xié)和醫(yī)學院基礎醫(yī)學院細胞中心的劉玉琴教授和北京四環(huán)生物制藥有限公司的車間主任呂健龍以及黃岡職業(yè)技術學院段院生等在配套音像資料的拍攝上做了大量工作。在此，作者謹向化學工業(yè)出版社、北京協(xié)和醫(yī)學院和北京四環(huán)生物制藥有限公司等單位致以誠摯的感謝。由于作者的經(jīng)驗和水平有限，書中難免會有疏漏與不足之處，敬請廣大讀者與同仁批評指正。編者2014年4月
蘭蓉，北京電子科技職業(yè)技術學院，北京市教學名師、生物工程學院教授，在生物技術專業(yè)人才培養(yǎng)中有自己獨到的見解，對培養(yǎng)目標、培養(yǎng)規(guī)格和課程體系剖析透徹。
第一部分動物細胞培養(yǎng)
動物細胞培養(yǎng)概述2
一、動物細胞培養(yǎng)的基本概念及優(yōu)缺點2
二、動物細胞培養(yǎng)發(fā)展史4
三、動物細胞培養(yǎng)的應用6
四、動物細胞培養(yǎng)工作的基本要求和工作方法8
【難點自測】9
項目一VERO細胞的傳代培養(yǎng)10
【項目介紹】10
一、項目背景10
二、學習目標10
三、項目任務10
【項目實施】10
任務一VERO細胞培養(yǎng)前的準備10
·必備知識11
一、培養(yǎng)細胞的生長條件11
二、動物細胞培養(yǎng)設備14
三、動物細胞培養(yǎng)用品18
四、動物細胞培養(yǎng)用液25
五、動物細胞培養(yǎng)常用的消毒和無菌處理方法31
·操作規(guī)程34
一、動物細胞培養(yǎng)常用設備的使用34
二、動物細胞培養(yǎng)用品的清洗、包裝和滅菌36
三、動物細胞培養(yǎng)用液的配制和無菌處理39
四、動物細胞培養(yǎng)的無菌操作41
任務二VERO細胞的傳代和觀察43
·必備知識43
一、動物細胞傳代培養(yǎng)技術43
二、培養(yǎng)細胞的細胞生物學45
三、培養(yǎng)細胞的觀察和檢測技術52
·操作規(guī)程58
一、VERO細胞的傳代培養(yǎng)58
二、VERO細胞的常規(guī)觀察59
任務三VERO細胞的凍存和復蘇60
·必備知識60
一、細胞的凍存60
二、細胞的復蘇61
三、細胞活性檢查61
四、細胞計數(shù)62
· 操作規(guī)程63
一、VERO細胞的凍存63
二、VERO細胞的復蘇64
三、VERO細胞的活性檢查65
【項目拓展知識】66
一、動物細胞培養(yǎng)實驗室的設計與布局66
二、動物細胞培養(yǎng)的其他常用液67
三、培養(yǎng)細胞的運輸和短期保存68
【項目難點自測】69
項目二雞胚成纖維細胞的原代培養(yǎng)71
【項目介紹】71
一、項目背景71
二、學習目標71
三、項目任務71
【項目實施】71
任務一組織塊法培養(yǎng)雞胚成纖維細胞71
·必備知識71
一、培養(yǎng)細胞的取材72
二、組織塊培養(yǎng)法73
·操作規(guī)程74
一、操作用品74
二、操作步驟75
任務二消化法培養(yǎng)雞胚成纖維細胞76
·必備知識76
一、組織材料的分離76
二、消化培養(yǎng)法77
·操作規(guī)程78
一、操作用品78
二、操作步驟78
【項目拓展知識】79
一、正常組織細胞的培養(yǎng)79
二、腫瘤細胞培養(yǎng)82
【項目難點自測】85
項目三CHO細胞的大規(guī)模培養(yǎng)87
【項目介紹】87
一、項目背景87
二、學習目標87
三、項目任務87
【項目實施】88
·必備知識88
一、動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術概述88
二、動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法89
三、動物細胞培養(yǎng)反應器96
四、動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術的操作方式100
·操作規(guī)程101
【項目拓展知識】105
一、植物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術的概念105
二、植物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的應用和工業(yè)前景105
三、植物細胞大規(guī)模培養(yǎng)流程107
四、植物細胞的規(guī)模化培養(yǎng)體系的建立107
五、植物細胞的大規(guī)模培養(yǎng)方法109
六、植物細胞生物反應器111
【項目難點自測】113
項目四抗人血白蛋白雜交瘤細胞系的制備115
【項目介紹】115
一、項目背景115
二、學習目標115
三、項目任務115
【項目實施】115
任務一人血白蛋白免疫小鼠的準備115
·必備知識115
一、單克隆抗體的概念115
二、雜交瘤技術制備單克隆抗體的基本原理116
三、雜交瘤技術制備單克隆抗體的主要過程116
四、動物免疫116
·操作規(guī)程117
一、操作用品117
二、操作步驟117
任務二骨髓瘤細胞和脾細胞的融合118
·必備知識118
一、脾細胞、骨髓瘤細胞及飼養(yǎng)細胞的制備118
二、細胞融合和雜交瘤細胞的篩選119
·操作規(guī)程121
一、操作用品121
二、操作步驟121
任務三抗人血白蛋白雜交瘤細胞的篩選124
·必備知識124
一、酶聯(lián)免疫吸附法124
二、雙向擴散法124
·操作規(guī)程125
任務四抗人血白蛋白雜交瘤細胞的克隆培養(yǎng)126
·必備知識126
一、有限稀釋法127
二、軟瓊脂平板法127
三、顯微鏡操作法127
四、熒光激活分離法127
·操作規(guī)程128
【項目拓展知識】128
一、雜交瘤技術的誕生128
二、雜交瘤細胞株的凍存和復蘇129
三、單克隆抗體的大量制備與純化129
四、細胞的基因轉染技術130
【項目難點自測】132
第二部分植物細胞培養(yǎng)
植物細胞培養(yǎng)概述136
一、植物組織培養(yǎng)136
二、植物細胞培養(yǎng)137
三、植物組織細胞培養(yǎng)的發(fā)展史138
四、植物組織細胞培養(yǎng)的應用140
【難點自測】142
項目五胡蘿卜細胞的懸浮培養(yǎng)144
【項目介紹】144
一、項目背景144
二、學習目標144
三、項目任務144
【項目實施】145
任務一MS培養(yǎng)基的制備145
·必備知識145
一、植物細胞培養(yǎng)的實驗室條件145
二、植物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基150
·操作規(guī)程156
任務二胡蘿卜愈傷組織的誘導159
·必備知識159
一、外植體的選擇和預處理159
二、植物愈傷組織培養(yǎng)的形成過程161
三、植物愈傷組織培養(yǎng)的一般程序162
四、植物組織細胞培養(yǎng)的無菌操作163
·操作規(guī)程163
任務三胡蘿卜細胞的懸浮培養(yǎng)164
·必備知識164
一、單細胞的分離164
二、懸浮培養(yǎng)細胞的生長和測定166
三、懸浮培養(yǎng)細胞的同步化167
四、植物細胞培養(yǎng)的環(huán)境條件167
·操作規(guī)程169
【項目拓展知識】170
一、植物細胞的固定化培養(yǎng)170
二、植物單細胞培養(yǎng)172
【項目難點自測】174
附錄細胞培養(yǎng)技術常用術語中英文對照177
參考文獻 182
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